Flumist四价流感疫苗：特点、制造工艺及使用方法

Flumist四价（流感疫苗活疫苗，鼻内）是一种通过鼻内喷雾给药的四价活疫苗。它是针对四种不同流感病毒株的疫苗，包括A/H1N1、A/H3N2和两种B株。Flumist四价包含来自B/Yamagata/16/88和B/Victoria/2/87谱系的B菌株。这种疫苗是使用与Flumist相同的工艺制造的。

Flumist四价中的流感病毒株具有以下特性：（a）冷适应（CA），即它们能够在25°C的温度下有效复制，而野生型流感病毒的复制受到该温度的限制；（b）温度敏感（TS），即它们在37°C（B型毒株）或39°C（A型毒株）下复制受到限制，而许多野生型流感病毒在此温度下能够有效生长；以及（c）减毒（ATT），即它们在人类流感感染的雪貂模型中不会产生典型的流感样疾病。

对于Flumist四价中的每个重配株，负责CA、TS和ATT表型的六个内部基因片段均来自主供体病毒（MDV），而编码两种表面糖蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的两个片段来自相应的抗原相关的野生型流感病毒。因此，Flumist四价中包含的四种病毒保持了MDV的复制特性和表型特性，并表达了野生型病毒的HA和NA。对于A型MDV，至少有五个遗传基因座在三个不同的内部基因片段中对TS和ATT表型有贡献。对于B型MDV，至少有三个遗传基因座在两个不同的内部基因片段中对TS和ATT特性有贡献；而五个遗传基因座在三个基因片段中控制了CA属性。

美国公共卫生局（USPHS）建议将三种病毒（A/H1N1、A/H3N2和一种B株）纳入年度三价和四价流感疫苗制剂中。此外，USPHS还建议将另一种B株纳入四价流感疫苗制剂中。

制造Flumist四价的过程是将每种重配菌株接种到无特定病原体（SPF）卵中，然后孵育以让疫苗病毒复制。随后，收集这些卵的尿囊液，进行合并，并通过过滤澄清。通过超速离心浓缩病毒，并用稳定缓冲液稀释，以获得最终的蔗糖和磷酸钾浓度。然后将病毒收获物无菌过滤以产生单价散装。每个批次都进行了CA、TS和ATT表型测试，并且还通过体外和体内方法进行了广泛的测试，以检测外来物质。随后将来自四种菌株的单价原液混合并根据需要稀释，以达到稳定缓冲液的所需效力，从而生产四价原液疫苗。然后将散装疫苗直接填充到单个喷雾器中进行鼻腔给药。每个预填充冷冻Flumist四价喷雾器包含一个0.2ml剂量。每个0.2ml剂量包含10^6.5-7.5 FFU（荧光聚焦单位）的四种毒株中的每一种的活减毒流感病毒重配株：A/Bolivia/559/2013（H1N1）（A/California/7/2009（H1N1）PDM09样病毒），A/New Caledonia/71/2014（H3N2）（A/Hong Kong/4801/2014）。每0.2ml剂量还含有0.188mg/剂量味精，2.00mg/剂量水解猪明胶，2.42mg/剂量精氨酸，13.68mg/剂量蔗糖，2.26mg/剂量磷酸氢二钾和0.96mg/剂量磷酸二氢钾。每个剂量含有残留量的卵清蛋白（<0.24mcg/剂量），还可能含有残留量的硫酸庆大霉素（<0.015mcg/ml）和乙二胺四乙酸（EDTA）（<0.37mcg/剂量）。